Оценка свежеполученной спермы
Объем эякулята измеряется с помощью градуированного спермоприемника. Объем первой фракции обычно составляет 0,2-2 мл, второй - 0,5-3 мл, - третьей – 15-20 мл (ее обычно не используют).
При изменении окраски сперма непригодна для дальнейшего использования.
Концентрация спермиев. Считают с помощью стандартных методик в счетной камере. Норма в 1 мл – 300-800 миллионов.
Общее количество спермиев. 300-1000 миллионов в эякуляте.
Активность. Каплю спермы исследуют на предметном стекле (на обогревательном столике Морозова) при температуре 37оС. Накрывают теплым покровным стеклом. Норма - более 70% спермиев имеют прямолинейные поступательные движения (от 7 баллов).
Подсчет живых спермиев ведут согласно общепринятым методикам (смешивание спермы с красителями (чаще с эозином или нигрозин-эозином)). Головки мертвых спермиев хорошо окрашиваются красителем, головки живых – не окрашиваются. Допускается не более 20% мертвых спермиев.
Разбавление и хранение спермы
1. Кратковременное хранение при комнатной температуре в течение не более 4 часов.
Используется как неразбавленная, так и разбавленная, например пастеризованным молоком (1:8), сперма. При осеменении свежеполученной спермой, получают результаты оплодотворяемости, сравнимые с естественной случкой. Процент положительных результатов – около 85%, практически, как при естественном осеменении.
2. Хранение при температуре +5°С.
Эякулят сразу после получения и оценки разбавляют специальной синтетической средой и сохраняют, охладив до +5°С (в обычном холодильнике), в течение 2-4 суток, что позволяет транспортировать сперму.
В качестве разбавителя используют различные среды, в состав которых входят вещества, оказывающие защитное влияние на половые клетки.
Состав разбавителей по Шетцу:
1). Сухой порошок молока (10,0), желток куриного яйца (10,0), вода дистиллированная (до 100,0 мл);
2). 2% раствор глицерина с желтком;
3). 5-6% раствор глюкозы или фруктозы с желтком;
4). 3% раствор натрия цитрата с желтком.
Состав разбавителя по Е.П. Баутиной: гликокол (1,82), цитрат натрия (0,72), желток куриного яйца (5,0), вода дистиллированная (до 100,0 мл).
Процедура осеменения собак охлажденной спермой аналогична таковой при использовании свежеполученной спермы (перед введением дозу спермы подогревают в водяной бане).
В случае применения высококачественных разбавителей и проведения осеменения в оптимальное по отношению к овуляции время, возможно получать от охлажденной спермы высокую (75-80%) оплодотворяемость. Но обычно результативность осеменения охлажденной спермой на 20% ниже, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.
3. Хранение в жидком азоте (-196°С).
Метод предусматривает использование замороженной в жидком азоте спермы (срок ее спермы практически не ограничен).
Центры по криоконсервации спермы собак работают во многих странах мира и используют практически одинаковые методы ее замораживания, но при этом применяют различные синтетические разбавители, в том числе и патентованные.
Сперму кобелей обычно замораживают в виде гранул объемом 0,2 мл или в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. Преимуществами замораживания спермы в соломинках являются лучшие условия стерильности и возможность их маркировки данными о производителе: порода, кличка, дата взятия спермы и т.д.
Оттаивают сперму, замороженную в гранулах, при 37°С в изотонических растворах, а соломинки - в водяной бане при 35-37°С.
При использовании замороженной спермы на оплодотворяемость сук оказывают влияние многие факторы: состав синтетической среды, качество спермы, температура ее оттаивания, число биологически полноценных спермиев в дозе, время и техника осеменения, локус введения спермы в половые пути.
В дозе спермы перед замораживанием должно содержаться не менее 150-200 миллионов подвижных спермиев.
Сразу после получения и оценки, эякулят разбавляют в 2-3 раза специальным криозащитным разбавителем, содержащим различные вещества, предохраняющие спермии от повреждений во время замораживания. В частности, в их состав обязательно входят глицерин и желток куриного яйца.
Состав разбавителя: ТРИС 6,06, фруктоза 2,5 г, лимонная кислота 3,4 г, дистиллированная вода 184 г, глицерин 8 г, желток 20 г, трициллин 0,5 г.
После разбавления сперму охлаждают в холодильнике в течение 2-3 ч до +4°С, а затем замораживают с использованием жидкого азота до температуры -196°С.
При хранении замороженной спермы в жидком азоте (в сосуде Дьюара) она способна сохранять биологическую полноценность в течение многих десятков лет.
Поскольку, в процессе замораживания-оттаивания разрушается до 50% спермиев, желательно вводить дозу непосредственно в полость матки. Эффективность – до 60%.
Я так думаю, на вязку с искусственным осеменением необходимо ехать с ветеринаром ( а он с микроскопом и т.д.)
МЕТОДЫ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ
Влагалищное осеменение
Внутриматочное осеменение
Осеменение катетером Фоли
Осеменение при помощи норвежского катетера (Д. Фогнер)
Осеменение при помощи эндоскопа
Хирургическая методика